3:13 ص
الانتاج النباتي -
كتب الزراعة
كتاب : بروتوبلاست النبات : عزله و زراعته و تطبيقاته
عدد صفحات الكتاب : 184 صفحة
البروتوبلاست هي خلايا نباتية تمت إزالة جدران الخلايا منها إنزيميًا . فهي مكتملة النمو وحساسة ومتعددة الاستخدامات. تسمح المنصات القائمة على البروتوبلاست بإنشاء أنواع نباتية جديدة عبر اندماج وتجديد البروتوبلاست . يستكشفون نقل الإشارة والمسارات الأيضية التي تستجيب بشكل عابر للهرمونات وعوامل الإجهاد ، والإجابة على أسئلة محددة تتعلق بأنواع الخلايا ، وتحديد التوطين الخلوي ، والنقل ، وتفاعلات البروتينات الموسومة . تعدد استخدامات البروتوبلاستس يسهّل بشكل كبير تطوير علم النبات الحديث .
على الرغم من إنشاء عدد من بروتوكولات عزل البروتوبلاست الفعالة للنباتات النموذجية والعديد من المحاصيل ، إلا أنها لا تزال تمثل تحديًا للعديد من النباتات والمحاصيل البستانية. أنسجة الأوراق هي أكثر المواد المستخدمة شيوعًا ، ويمكن عزل البروتوبلاست المتوسطة عالية الغلة بسهولة من التبغ ، الذرة (Z.Mays L.) ، والأرز (Oryza sativa L.) ، والعديد من الأنواع النباتية الأخرى غير النموذجية ، مثل Medicago sativa ، Panicum virgatum (Mazarei et al. ، 2008) ، Elaeis guineensis ، Hevea brasiliensis ، Phaseolus vulgaris ، and Magnolia . ومع ذلك ، لا يمكن عزل البروتوبلاست الكافية القابلة للحياة من الأوراق الناضجة للعديد من النباتات الأخرى بسبب قيود الأنواع. ومن ثم ، تم اختبار الشتلات المزروعة في المختبر ، وعزل البروتوبلاست المتوسطة الميزوفيل من Tanacetum ، والعنب (Vitis vinifera) ، والفلفل (Capsicum annuum L.) . ومع ذلك ، فإن تحريض الكالس يستغرق وقتًا طويلاً (عدة أشهر) ، وقد تم اختيار بتلات الزهور كبديل لعزل البروتوبلاست من نباتات الزينة ومع ذلك ، ذبلت الأزهار في غضون فترة قصيرة ، والبتلات ليست كافية لتزويد مستمر لعزل البروتوبلاست.
تم إجراء عزل البروتوبلاست عن الأنواع النباتية المختلفة بناءً على البروتوكولات مع بعض التعديلات. تم اختبار المواد المصدر المختلفة التي تم جمعها من بساتين الفاكهة Cymbidium ، بما في ذلك أغطية الزهور ، والأوراق الصغيرة ، وأنسجة قاعدة الأوراق ، ونصائح الجذور الشابة لعزل البروتوبلاست الخاص بالأنسجة والأعضاء. بالإضافة إلى ذلك ، تم اختبار أنسجة قاعدة الأوراق من Phalaenopsis و Paphiopedilum و Dendrobium و Arundina Orchids ونباتات الأرز والذرة لعزل البروتوبلاست. نمت نباتات الذرة والأرز لمدة 7 أيام بعد الإنبات ، ثم تم جمع قواعد أوراق هذه الشتلات لعزل البروتوبلاست ، بينما كانت أوراقها الصغيرة بمثابة عناصر تحكم.
تم تعقيم الأنسجة السطحية لمدة 3 دقائق في 75٪ كحول إيثيلي (النسبة المئوية للحجم ، حجم / حجم) ، تليها خمس غسالات في ماء معقم. تم تقطيع الأنسجة المعقمة إلى شرائح أو شرائح 0.5-1.0 مم باستخدام شفرات جراحية جديدة على ورق ترشيح معقم وتم نقلها على الفور إلى محلول إنزيم محضر حديثًا في دورق معقم سعة 100 مل. تم تحضير محلول الإنزيم على النحو التالي: 20 ملي KCl (Sigma ، St. 0.2 ، 0.3 ، 0.4 ، 0.5 ، 0.6 ، و 0.7 م (سيغما) ، السليلوز R-10 (0.6 ، 1.2 و 2.4 ، وزن / حجم) ، وماكروزيم R-10 (0.3 ، 0.6 ، و 1.2٪ ، ث / ت) (شركة ياكولت للصناعات الدوائية المحدودة ، نيشينوميا ، اليابان). ثم تم تسخين المحلول حتى 55 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، وتبريده إلى درجة حرارة الغرفة (-25 درجة مئوية). بعد ذلك ، تمت إضافة 10 ملي كلوريد الكالسيوم (سيغما) ، و 0.1 ٪ (وزن / حجم) ألبومين مصل البقر (سيغما) إلى تركيزات مختلفة من 2-مركابتوإيثانول (0 ، 1 ، 2 ، 5 ، و 10 ملي مولار) (سيغما).
لكل علاج ، تم تحضير 10 مل من محلول الإنزيم لحوالي 0.5 جرام من الأنسجة الطازجة. بعد الحضانة عند 28 درجة مئوية في الظلام مع دوران 30 دورة في الدقيقة لفترات مختلفة (2 و 4 و 6 و 8 ساعات) ، تم حصاد البروتوبلاست. بشكل عام ، تم تخفيف خليط الإنزيم المحتوي على بروتوبلاست بحجم متساوٍ من محلول الغسيل (W5) الذي يحتوي على 154 ملي مولار كلوريد الصوديوم (سيغما) ، 125 ملي مول كلوريد الكالسيوم ، 5 ملي مول كلوريد ، و 4 ملي مولار من كلوريد الصوديوم (الرقم الهيدروجيني = 5.7). تم ترشيح المحلول المحتوي على بروتوبلاست من خلال شبكة نايلون 150 ميكرومتر في أنبوب طرد مركزي ذو قاع دائري سعة 50 مل وطرده عند 100 × جم لمدة دقيقتين لتكوير البروتوبلاست (عند درجة حرارة الغرفة -25 درجة مئوية). بعد ذلك ، تمت إزالة المادة الطافية بعناية قدر الإمكان باستخدام حقنة معقمة. تم إعادة تعليق حبيبات البروتوبلاست في 20 مل من محلول W5 (Negrutiu et al. ، 1986) ، ثم تم تقدير إنتاجية البروتوبلاست وقابليتها للحياة......
---------------------
-------------------------------
ليست هناك تعليقات: